CASO CLÍNICO: BROTE DE ENFERMEDAD DEL MÚSCULO BLANCO O MIODEGENERACIÓN NUTRICIONAL EN TERNEROS

Clinical Case: Outbreak of White Muscle Disease or Nutritional Muscular Dystrophy in Calves

Pedro A. Contreras^1*, Enrique Paredes², Fernando Wittwer ¹ y Sergio Carrillo³

¹Instituto de Ciencias Clínicas Veterinarias. ²Instituto de Patología Animal.
Universidad Austral de Chile, Casilla 567, Valdivia, Chile. ³Cooprinsem, Puerto Varas, Chile. E-mail: pcontre1@uach.cl

RESUMEN

Un brote de Enfermedad del Músculo Blanco, EMB, o miodegeneración nutricional afectó una crianza de 56 terneros Frisones Rojos. En 45 días murieron 18 animales, de aproximadamente 5 meses de edad. Los signos eran taquipnea, dificultad para caminar, sin fiebre, taquicardia e ingurgitación de venas yugulares. Sin alteraciones nerviosas ni digestivas. Los músculos de los miembros pélvicos, de la región lumbar y glutea presentaban endurecimiento moderado y leve dolor a la presión. En el rebaño se observaron muertes súbitas de terneros o a las pocas horas de presentarse los primeros signos. En la sangre la actividad de la enzima selenio (Se) dependiente glutatión peroxidasa, GSH-Px, estaba disminuida, señalando una deficiencia marginal de selenio. La actividad de enzimas asociadas a daños musculares, aspartato aminotransferasa (AST), y creatín quinasa (CK), estaban muy aumentadas. La necropsia reveló cardiomegalia con hipertrofia del ventrículo derecho, zonas con finas estriaciones longitudinales blanquecinas en epicardio y en el miocardio múltiples áreas irregulares también de color blanquecino. Los músculos esqueléticos en general estaban pálidos y se observaron con aspecto blanquecino. El examen histopatológico del miocardio evidenció células musculares eosinofílicas e irregulares, con pérdidas de la estriación, destrucción segmental, núcleos grandes y pleomórficos; las células de Purkinje presentaban intensa eosinofilia y degeneración hialina de Zenker. También se observó degeneración hialina en los músculos esqueléticos. Se diagnostica Enfermedad del Músculo Blanco. Los terneros sobrevivientes fueron tratados con solución inyectable intramuscular de Se y vitamina E, en dosis equivalente a 8 mg de Se más 340 U.I. de vitamina E, repitiéndose a los 7 días. Instaurado el tratamiento no se presentaron nuevos casos.

Palabras clave: EMB, miodegeneración nutricional, selenio, vitamina E, terneros.

ABSTRACT

An outbreak of White Muscle Disease, WMD, or Nutritional Muscular Dystrophy is reported in a flock of 56 Red Friesian calves, where 18 calves of 4 to 5 months of age died in a period of 45 days. The signs observed were tachypnea, difficulty to walk, tachycardia, dilated jugular veins, temperature 38-39°C. Signs of alterations of the nervous or digestive systems were not observed. Muscles of the hind legs, dorsal and gluteal region were moderate swollen, painful and temperature was increased. In the flock sudden deaths of calves were observed within a few hours after appears the first signs. The blood activity of the selenium (Se) dependent enzyme Glutation peroxidase (GSH-Px) was decreased, indicating a Se deficiency. The serum activity of the enzymes associated to muscle damage, Aspartate Amino Transferase (AST) and Creatin Kinase (CK) were increased. The necropsy findings were cardiac enlargement with hypertrophy of the right ventricle. In the myocardium white fine lines of degeneration and also multiple irregular areas with the same colour were observed. Similar lesions were observed on the skeletal muscles. Histologically the myocardium lesions were eosinophilic and irregular muscular cells, with lost of the striation, segmental destruction, as well as great and pleomorfic nuclei; in addition, the Purkinje fibres presented intense eosinophilia and hyaline degeneration corresponding to degeneration of Zenker. The skeletal muscles also presented hyaline degeneration of Zenker. It is concludes that it is White Muscle Disease associated to deficiency of Selenium or vitamin E. Surviving calves were treated with an intramuscular solution of Se and vitamin E, in dose equivalent to 8 mg of Se and 340 U.I. of vitamin E. The treatment was repeated after 7 days and new cases did not appear.

Key words: WMD, nutritional myodegeneration, selenium, vitamin E, calves.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 406 - 411, 2005

DIROFILARIOSIS EN CANINOS: ESTUDIO ANATOMOPATOLÓGICO DE 15 CASOS

Canine Dirofilariosis: A Pathologic Anatomy Study of 15 Cases

 Oswaldo E. Vale Echeto¹*, David Simoes², Jesús E. Camacho¹, Oswaldo R. Vale Oviedo³ y María Oviedo de Vale⁴

¹Cátedra de Anatomía Patológica. ²Cátedra de Parasitología. ⁴Cátedra de Salud Pública.
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. Apartado 15252, Maracaibo 4005-A, Venezuela. *E-mail: lupecheto@latinmail.com. ³Médico Veterinario en ejercicio libre. Estudiante de Posgrado, FCV-LUZ

RESUMEN

El objetivo del presente estudio es reportar los cambios anatomopatológicos que ocurren en la dirofilariosis canina en su forma cardiopulmonar así como los daños relevantes que se producen en órganos vitales en la forma sistémica en caninos. La dirofilariosis canina también llamada enfermedad del gusano del corazón es una enfermedad parasitaria producida por el nemátodo Dirofilaria inmitis que ocurre con una alta prevalencia a nivel mundial y constituye uno de los problemas patológicos más relevantes en el ámbito de la cría de caninos. La patogénesis de la enfermedad es bien conocida y sus cambios anatomopatológícos han sido bien documentados en otros países. En Venezuela se ha reportado la enfermedad con sus aspectos clínicos pero los cambios relevantes, tanto macroscópicos como la histopatología, no han recibido la atención que merecen. Quince caninos, 8 machos y 7 hembras de diferentes razas y entre 5 y 14 años de edad fueron necropsiados. Los cambios macro y microscópicos en órganos y tejidos de corazón, pulmón, bazo, hígado y riñón más relevantes son reportados. Se realizaron frotis sanguíneos detectándose la presencia de microfilarias con sus características típicas y se realizó la evaluación morfológica de parásitos adultos.

Palabras clave: Dirofilariosis, caninos, anatomía patológica, estudio.

ABSTRACT

The objective of this paper is to report the main pathological changes and relevant tissue damages caused by adult worms in heart and lungs as well as the damage by microfilarias in the systemic form. Canine dirofilariosis also called (Heartworm disease) is a parasitic disease produced by a nematode Dirofilaria inmitis with a wide world high prevalence and it represents one of the most relevant pathologic problems in many kennels. The pathogenesis is well known and the pathological changes have been reported in other countries. In Venezuela, the disease and its clinical aspects have been studied, but the disease has gotten less attention about the relevant gross and microscopic changes in vital organs and tissues. Fifteen dogs, 8 males and 7 females of various breeds and between 5 and 14 years old were necropsied. The gross and microscopic changes from organs and tissues of heart, lungs, spleen, liver and kidneys are reported. Blood smears were done showing the presence of typical microfilarias and parasitologic evaluation of adult forms were also done.

 Key words: Dirofilariosis, canine, pathologic anatomy, study.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 412 - 420, 2005

EFECTO DE LA INFECCIÓN EXPERIMENTAL CON Trypanosoma vivax SOBRE PARÁMETROS HEMATOLÓGICOS EN OVINOS

Effect of Experimental Trypanosoma vivax Infection on Hematological Parameters in Sheep

Zulayne Valera, Omaira Parra, Manuel Alvarado, Glen Barboza, Freddys Escalona y Roger Ramírez

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. Maracaibo, Edo. Zulia, Venezuela. E-mail: zulayne@cantv.net

RESUMEN

El propósito de esta investigación fue conocer el efecto de la infección experimental de una cepa de Trypanosoma vivax, aislada en el estado Zulia, Venezuela, sobre los parámetros hematológicos en ovinos. Se utilizaron ocho ovinos mestizos West-African, con edades comprendidas entre 6 meses y 1 año, los cuales fueron separados en dos grupos. El grupo experimental, conformado por cuatro animales fue inoculado por vía intravenosa con 2 mL de sangre fresca, conteniendo aproximadamente 1,3 × 10⁶ tripanosomas/mL, tomada de un ovino positivo; el grupo control, estuvo conformado por los cuatro ovinos restantes. Se evaluaron durante 90 días los parámetros: temperatura corporal, parasitemia, hematocrito, hemoglobina, leucocitos y proteínas totales. Todos los animales infectados presentaron tripanosomas en sangre a partir del día 2 post-inoculación, desarrollando una parasitemia de tipo ondulante y un cuadro de anemia severa que persistió hasta el final del ensayo. El curso de la infección experimental con T. vivax permitió la identificación de dos fases: La primera fase, observada en las primeras cuatro semanas del período post-infección, en la cual, los ovinos inoculados presentaron altos niveles de parasitemia, fiebre remitente y un descenso significativo (P < 0,05) en los valores del hematocrito y hemoglobina con respecto al grupo control. El número total de leucocitos disminuyó principalmente en la primera semana post-infección, y permanecieron por debajo del grupo control durante todo el ensayo. La segunda fase fue evidenciada a partir de la quinta semana post-infección; en este período, los animales inoculados manifestaron niveles de parasitemia menores a los detectados en la fase anterior, fiebre remitente, persistencia de bajos valores del hematocrito y de la hemoglobina, además de un incremento significativo (P < 0,05) de las proteínas plasmáticas. Los cambios en los valores hematológicos y temperatura corporal estuvieron relacionados con la aparición de los tripanosomas en sangre y la intensidad de la parasitemia.

Palabras clave: Trypanosoma vivax, ovinos, infección experimental.

ABSTRACT

The purpose of this research was to know the effect of experimental infection with a stock of Trypanosoma vivax from Zulia state, Venezuela, on haematological parameters in sheep. Eight cross-breed West-African sheep between 6 months and 1 year old were aleatory divided in two groups. The experimental group (four sheep) was inoculated intravenously with 2 mL of fresh blood contained 1.3 × 10⁶ Tryp/mL from a positive ewe. The remaining four animals served as controls. The effects of the parasite on body temperature, parasitaemia, haematocrit, haemoglobin, leukocytes and total serum proteins were evaluated for 90 days. All the infected animals were positive for the parasite from 2 days post-inoculation, developing undulating parasitaemia and severe anaemia which persisted until the termination of the experiment. The course of experimental infection with T. vivax showed two phases: Phase 1, observed between first four weeks the post-infection period, the infected sheep developed high levels of parasitaemia, and decrease (P < 0.005) in haematocrit and haemoglobin compared to control group. Total leukocyte counts fell on the first week post-infection and remained much lower than the control group throughout the observation period. The second phase was evident from fifth week post-infection; in this period, the infected animals showed levels of parasitaemia lower than the preceding phase, remittent fever, persistence low values the haematocrit and haemoglobin, as well as, significant increase (P < 0.05) of serum proteins. The changes in the haematological parameters and body temperature were related to appear the trypanosomes in the circulation and to the intensity of parasitaemia.

Key words: Trypanosoma vivax, sheep, experimental infection.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 421 - 428, 2005

CARACTERIZACIÓN MORFOMÉTRICA DE LOS PEZONES
EN VACAS CARORA

Morphometric Characterization of the Teats in Carora Cows

Mario Riera-Nieves¹, José M. Rodríguez-Márquez¹, Eudomar Perozo-Prieto¹, Rita Rizzi² y Andrea Cefis²

¹Unidad de Investigación en Ciencias Morfológicas (UNICIM), Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia.
Maracaibo, Venezuela. E-mail mriera@luz.edu.ve.
²Instituto di Zootecnia, Facoltà di Medicina Veterinaria, Università di Milano. Milán, Italia. E-mail rita.rizzi@unimi.it

RESUMEN

Se estudiaron las características morfológicas de 2663 vacas Carora, de once fincas lecheras en seis Estados de Venezuela, la evaluación se hizo siguiendo un esquema subjetivo que describió tres diferentes formas de los pezones: embudo, cilíndrico y botella, y siete categorías para la forma de la punta de los pezones: redondeado, puntiagudo, plano, prolapsado, disco, invertido y mixto. Los pezones delanteros y traseros, derechos e izquierdos, fueron observados de manera separada, antes del ordeño de la tarde. El largo del pezón se midió desde la base del mismo, donde se une a la ubre, hasta el ápice del pezón. El diámetro del pezón se midió en aproximadamente en la mitad lo que corresponde a su parte más amplia. La frecuencia de la forma de pezón fue: 48,69% embudo, 32,84% cilíndricas y 15,34% botella. La frecuencia de la forma de la punta del pezón fue: 52,65% redondeado, 28,02% puntiagudo, 8,72%, plano, 4,3% prolapsado, 2,18% disco, 0,86% invertido y 0,12% mixto. El objetivo de la investigación fue categorizar en vacas Carora, las características morfológicas de los pezones, las cuales pueden ser importantes, en la producción de leche, velocidad de ordeño y en la resistencia individual a infecciones intramamarias.

Palabras clave:

Morfología del pezón, forma del pezón, forma de la punta del pezón.

ABSTRACT

Morphological characteristics of teats were studied in 2663 Carora Cows, from eleven dairy farms in six States of Venezuela, registered in the Carora Breeder Association. A subjective scheme of evaluation was develop to describe three different teat shapes: funnel, cylindrical and bottle and seven categories for teat-shape teat: round, pointed, plane, prolapsed, disk, inverted and mixed. Front right and left teat and rear right and left teat were observed separately prior afternoon milking. The length of the teat was measured of the base teat where attachment udder to the teat apex. The diameter of teat was measured middle high on the teat. Frequencies of teat shape were: 48.69% funnel, 32.84% cylindrical and 15.34% bottle. Frequencies of teat-end shape were: 52.65% round, 28.02% pointed, 8.72% plane, 4.3% prolapsed, 2.18% disk, 0.86% inverted and 0.12% mixed. The purpose of the investigation was to categorize in Carora cows, morphological characteristics of teat which may be of importance in order to yield milk, rate milking and the individual resistance to intramammary infections.

Key words:

Teat morphology, teat shape, teat end- shape.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 429 - 436, 2005

CALVES BORN UNDER TROPICAL CONDITIONS AFTER DIRECT TRANSFER OF CRYOPRESERVED in vitro PRODUCED EMBRYOS

Becerros nacidos bajo condiciones tropicales luego de la transferencia directa
de embriones producidos in vitro criopreservados

Héctor Nava-Trujillo¹, Aitor de Ondiz ², Eleazar Soto-Belloso^2,3, Juan Carlos Velarde³, Hugo Hernández-Fonseca^1,2
y Benjamin G. Brackett ⁴

¹Cátedra de Fisiología de los Animales Domésticos, Departamento de Biología Animal.
²Unidad de Investigación en Reproducción Animal.
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. Apartado 15252, Maracaibo 4005, Venezuela.
³VIATECA. La Villa del Rosario, Venezuela.
⁴Department of Physiology and Pharmacology, The University of Georgia. Athens GA., USA. E-mail: hjhernan@cantv.net.

ABSTRACT

In the present study, performance of 56 crossbred dual purpose heifers diagnosed as pregnant after direct transfer of in vitro produced embryos cultured in either media supplemented with serum (n = 23) or in a chemically defined media (n = 33) were compared. No differences were observed in the incidence of abortion (30.34% vs. 24.24%), dystocia (52.17% vs. 51.52%) and normal calving (17.39% vs. 24.24%) in pregnant heifers with embryos produced in either serum supplemented or chemically defined media respectively (P > 0.05). Sex of calves affected significantly the rate of dystocia (males, 83.33% and females, 50%; P < 0.05). The birthweight of calves was not affected (P > 0.05) neither by serum supplementation during in vitro culture (46.86 ± 2.04 kg for calves derived from embryos cultured in the serum supplemented media and 46.28 ± 1.42 kg, for calves derived from embryos cultured in the chemically defined media) nor by sex of calves (males, 47.20 ± 1.50 kg and females, 45.45 ± 1.84 kg). The birthweigh of calves born dead or dying soon after birth was significantly (P < 0.05) higher (51.92 ± 1.76 kg) than that of survivors calves (43.88 ± 1.22 kg). Neither serum supplementation during in vitro culture, sex of calves nor dystocia affected the perinatal survival of calves. In conclusion, the presence of serum during in vitro culture did not affect the reproductive performance of dual purpose pregnant heifers after direct transfer of in vitro produced embryos. Large offspring syndrome (LOS) as observed in this study was evidenced by high birthweigh of calves, high rate of abortions and dystocia.

Key words: In vitro embryo, in vitro culture, serum, defined media, large offspring syndrome.

RESUMEN

En el presente estudio se comparó el desempeño de 56 novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia directa de embriones producidos in vitro cultivados en un medio suplementado con suero o en uno químicamente definido. No se observaron diferencias en las tasas de aborto (30,43% vs. 24,24%), distocias (52,17% vs. 51,52%) y parto normal (17,39% vs. 24,24%) entre las novillas que recibieron embriones cultivados en el medio suplementado con suero y las que recibieron embriones cultivados en el medio químicamente definido. El sexo de la cría afectó significativamente el porcentaje de distocias, 83,33% para machos y 50% para hembras, (P < 0,05). El peso al nacimiento de los becerros tampoco se vio afectado (P > 0,05) por la suplementación sérica durante el cultivo (46,86 ± 2,04 kg, para los becerros derivados de los embriones cultivados en el medio suplementado con suero y 46,28 ± 1,42 kg, para los derivados de los embriones cultivados en el medio químicamente definido) ni por el sexo de la cría (machos, 47,20 ± 1,50 kg y hembras, 45,45 ± 1,84 kg). El peso de los becerros que nacieron muertos o que murieron luego del nacimiento fue significativamente (P < 0,05) mayor (51,92 ± 1,76 kg) al de los becerros que sobrevivieron (43,88 ± 1,22 kg). La sobrevivencia perinatal no se vio afectada ni la suplementación sérica durante el cultivo embrionario, ni por el sexo de los becerros o el nacimiento de un parto distócico. En conclusión, la presencia de suero en el medio de cultivo no afectó el desempeño de las novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia de embriones producidos in vitro. En este estudio se observó la presencia de becerros con el síndrome del recién nacido gigante evidenciado por un alto peso al nacimiento y una alta tasa de abortos y distocias.

Palabras clave: Embrión in vitro, cultivo in vitro, suero, medio definido, síndrome del recién nacido gigante.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 437 - 442, 2005

PUBERTAD EN CORDEROS PELIBUEY NACIDOS DE OVEJAS
CON REPRODUCCIÓN ESTACIONAL O CONTINUA

Puberty in Male Pelibuey Lambs, Offspring of Seasonal or Continuous Breeding Ewes

 Javier Valencia Méndez, Maria J. Trujillo Quiroga, Mario A. Espinosa Martínez, Jaime Arroyo Ledezma
y José M. Berruecos Villalobos

Departamento de Reproducción, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México. 04510, México, D.F. E-mail: jjvm@servidor.unam.mx

RESUMEN

Corderos Pelibuey (n = 14) nacidos de siete madres con reproducción estacional (E) o de otras siete continuas (C) fueron mantenidos en condiciones intensivas con la finalidad de determinar si existen diferencias en algunos eventos asociados a la pubertad. Los corderos, nacidos en noviembre, fueron pesados cada 15 días, y una vez destetados a los 60 días fueron revisados semanalmente para registrar el momento del completo desprendimiento de adherencias prepuciales (DAP) y el grado de desarrollo de la circunferencia escrotal (CE). Al observarse el DAP, los corderos fueron sometidos semanalmente a electro-eyaculación (7,5 volts). No existieron diferencias (P > 0,05) entre los dos grupos en la edad al DAP (92,29 ± 27,63 vs 95,43 ± 15,69 días para corderos E y C, respectivamente), y en el peso corporal al DAP (24,43 ± 2,98 vs 24,14 ± 1,93 kg) y la CE (17,14 ± 2,17 vs 18,14 ± 1,44 cm) a esta edad. La CE se correlacionó con el DAP (r = 0,59, P = 0,026) y el peso corporal en este momento (r = 0,69, P = 0,007). Por otro lado, los corderos de ambos grupos tampoco mostraron diferencias (P > 0,05) en el momento en que alcanzaron la pubertad, referida como el momento en que se obtuvo un eyaculado con al menos 50 × 10⁶ espermatozoides/mL y al menos 50% de motilidad (144,07 ± 8,43 días), el peso corporal (32,60 ± 3,94 kg) la CE (25,86 ± 2,24 cm) y el porcentaje de anormalidades espermáticas (18,33 ± 15,57%). La edad a la pubertad se correlacionó con la CE (r = 0,59, P = 0,027). Los resultados sugieren que los mecanismos fisiológicos que provocan la aparición de la pubertad en corderos Pelibuey son independientes del patrón de reproducción de sus madres.

Palabras clave: Pelibuey, cordero, pubertad, circunferencia escrotal.

ABSTRACT

Male Pelibuey lambs (n 14) born from seven ewes with seasonal breeding (S) or seven non-seasonal ewes with continuous oestrus activity (C) were maintained under intensive management conditions to determine if there were any differences between them in events associated with puberty. All lambs, born in november, were weighted every 15 days and as soon as they were weaned (60 days of age), they were examined every week to record complete prepucial release (CPR) and to assess the development of the scrotal circumference (SC). As soon as CPR was observed, the lambs were submitted to electroejaculation (7.5 volts) once a week. There was no statistical difference between groups in the CPR (92.29 ± 27.63 vs 95.43 ± 15.69 days for S and C, respectively), body weight (BW; 24.43 ± 2.98 vs 24.14 ± 1.93 kg) or SC (17.14 ± 2.17 vs 18.14 ± 1.44 cm) at that age. SC was a significantly correlated (P = 0.026) with CPR (r 0.59) and highly correlated (P = 0.007) with BW (r 0.69). There were also no differences (P > 0.05) in age at puberty, considerated as the age when an ejaculate had at least 50 × 10⁶ sperms/mL and 50% motility (144.07 ± 8.43 days), BW (32.60 ± 3.94 kg), SC (25.86 ± 2.24 cm) and the percentage of sperm cells abnormalities (18.33 ± 15.57%). Age at puberty was significantly correlated (P = 0.027) with SC (r = 0.59). The results suggested that the physiological mechanisms that induce puberty in the male Pelibuey lambs are independent of the reproduction pattern of their mothers.

 Key words: Pelibuey, male lamb, puberty, scrotal circumference.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 443 - 450, 2005

EFECTO DE LA EXPOSICIÓN AL CLORURO DE CADMIO
SOBRE LA MADURACIÓN IN VITRO DE OVOCITOS BOVINOS

Effects of Cadmium Chloride Exposure on in vitro Maduration of Bovine Oocytes

 Bellaliz E. Rodríguez Tellez¹, Letty Marcano² y Patricia C. Villamediana Monreal ¹

¹Laboratorio de Citogenética. ²Laboratorio de Biología Celular.
Departamento de Biología, Facultad Experimental de Ciencias, Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela.
Apartado Galerías 15692. E-mail: pcvmonreal@cantv.net

RESUMEN

Se estudió el efecto del cadmio sobre la maduración in vitro de ovocitos bovinos. Ovocitos recuperados a partir de ovarios bovinos recolectados en matadero y liberados mediante la técnica de slicing fueron madurados en TCM199 durante 24 h a 38,5°C en una atmósfera con 5% CO₂ en aire saturado de humedad, en presencia de 0, 1, 5 y 10 ppm de cloruro de cadmio. Al finalizar el cultivo, los ovocitos fueron fijados en etanol:ácido acético (3/1 v/v) a 4°C durante al menos 24 h para luego teñirlos con aceto-orceína al 1,1%, para evaluar el estadio nuclear bajo microscopio óptico. El ANOVA demostró que el cadmio causa un bloqueo meiótico significativo (F = 150,996; P < 0,01) e induce degeneración ovocitaria (F = 89,92; P < 0,01) de manera dependiente de la concentración. El porcentaje de ovocitos que alcanzaron el estadio de MII fue superior en el grupo control (P < 0,01) en comparación con los expuestos al metal a las diferentes concentraciones estudiadas. Se establece una correlación inversa altamente significativa entre el porcentaje de ovocitos madurados y la concentración del metal en el medio (r = 0,818; P < 0,01), mientras que el porcentaje de ovocitos degenerados muestra una correlación directa altamente significativa (r = 0,842; P < 0,01). Además se apreciaron aberraciones cromosómicas tales como: picnosis, stekinesis y puentes anafásicos. Se demostró el efecto deletéreo del cadmio sobre los ovocitos bovinos, reflejado en un bloqueo de la maduración in vitro, la inducción de degeneración y aberraciones cromosómicas.

Palabras clave: Cadmio, ovocito, bovino, maduración in vitro, toxicología.

ABSTRACT

The effects of cadmium chloride on in vitro maturation of bovine oocytes were studied. Ovaries were collected from slaughterhouse cows and oocytes recovered by the slicing technique. Oocytes were matured in TCM199 for 24h at 38.5°C in 5%CO₂ in air, in presence of 0, 1, 5 and 10 ppm of cadmium chloride. At the end of culture oocytes were fixed for 24 h in etanol:acetic acid (3:1 v/v) at 4°C. They were then stained in toto with 1.1% acetic orcein and the nuclear stage was observed under optic microscope. The ANOVA showed that cadmium caused a significant blockage of meiotic maturation (F = 150.996; P < 0.01) and induced oocyte degeneration (F = 89.92; P < 0.01) in concentration dependent manner. The percentage of oocytes that reached the MII stage was greater in control group (P < 0.01) than in the cadmium-treated oocytes. A highly significant inverse correlation was established between the percentage of matured oocytes and the metal concentration in the medium (r = 0.818; P < 0.01), while the percentage of oocyte degeneration showed a highly significant direct correlation (r = 0.842; P < 0.01). Furthermore, chromosomal aberrations were observed, such as: picnosis, stekinesis and anaphasic bridges. Hence, a deleterious effect of cadmium chloride on in vitro matured oocytes by a blockage of meiotic maturation, induction of degeneration and chromosomal aberrations was established.

Key words: Cadmium, oocytes, bovine, in vitro maturation, toxicology.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 451 - 457, 2005

COMPARACIÓN DE MÉTODOS PARA DETERMINAR EL FLUJO ILEAL DE AMINOÁCIDOS ENDÓGENOS Y LA DIGESTIBILIDAD VERDADERA DE AMINOÁCIDOS DE HARINA DE PESCADO SUMINISTRADA A RATAS

Comparison of Methods for the Determination of Ileal Endogenous Aminoacids Flow
and True Aminoacids Digestibility in Fishmeal Feeding to Rats

Lourdes Gutiérrez-Coronado, Leticia García-Rico, Francisco Vázquez-Ortiz y Saúl Ahumada Montoya

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. Carretera a la Victoria Km. 0.6, Apartado Postal 1735.
Hermosillo, Sonora, México. C.P. 83000. Tel (662) 2 89 24 00 ext 292, Fax (662) 2 50 80 00. E-mail: lulu@cascabel.ciad.mx

RESUMEN

El flujo ileal de aminoácidos endógenos (FIAE) fue determinado alimentando ratas (Rattus norvergicus) con dos dietas: una dieta libre de nitrógeno (LN) y otra dieta a base de caseína hidrolizada enzimáticamente (CHE) como única fuente de nitrógeno. Para determinar la digestibilidad ileal verdadera de aminoácidos (AA) las ratas fueron alimentadas con una dieta a base de harina de pescado (HP). Se utilizaron 27 ratas macho Sprague-Dawley de 100 ± 5 g de peso inicial promedio divididas en tres grupos de nueve, confinadas individualmente bajo condiciones controladas. Las dietas se ofrecieron por tres horas (8:30-11:30 a.m.). Al término del experimento las ratas fueron sacrificadas para remover 20 cm de íleon terminal. La digesta ileal de las ratas alimentadas con CHE se liofilizó y ultrafiltró. El precipitado más el retenido o concentrado (fracción de alta masa molecular) obtenido de la ultrafiltración (UF) fueron utilizados para determinar el flujo endógeno. El FIAE para las ratas alimentadas con CHE fue mayor que para las alimentadas con la dieta LN (P < 0,05), con excepción de alanina. El alimentar con una dieta LN, por si mismo, no tiene influencia en el FIAE de la rata, pero hay un efecto directo de los péptidos pequeños en la pérdida neta de AA endógenos en el intestino delgado. La producción de estos AA es variable y depende de varios factores, entre los que destaca el peso corporal de las ratas. En este estudio se utilizaron ratas de menor peso y para ambas dietas se obtuvieron valores más bajos de flujo ileal a los reportados. La digestibilidad ileal verdadera de AA de HP determinada con la dieta LN fue más baja que la determinada con la técnica de CHE-UF. Esta técnica se considera una buena alternativa al método clásico de la dieta LN, para la determinación rutinaria de flujo ileal endógeno.

Palabras clave: Flujo ileal, aminoácidos endógenos, dieta libre de nitrógeno, caseína hidrolizada enzimaticamente, ultrafiltración, ratas.

ABSTRACT

Endogenous ileal aminoacid flow was determined feeding rats (Rattus norvergicus) two diets: one nitrogen free diet (NF) and another diet based in enzymically hydrolyzed casein (EHC) as the sole nitrogen source. To estimate the true ileal AA digestibility the rats were fed a fishmeal (FM) based diet. Twenty seven Sprague-Dawley male rats with an average initial weight of 100 ± 5 g divided into three groups of nine rats were used, which were individually allocated under control conditions. The diets were offered for three hours (08:30-11:30 a.m.). The rats were sacrifized to remove 20 cm of terminal ileum. The ileal digesta of rats fed EHC were liofilized and ultrafiltrated. The precipitate plus retenate (high molecular weight fraction) were used for the determination of ileal endogenous flow. The endogenous flow of AA for EHC fed rats was higher than for the nitrogen-free diet (P < 0.05), excluding alanine. The protein deplete state per se does not influence endogenous aminoacid flow at the terminal ileum of the rat, but there is a direct effect of small peptides on the net loss of endogenous AA from the small intestine. The endogenous flow of AA determined for both diets was lower than values reported in literature, which could be associated to the lower liveweight of the rats used in this study. The true ileal AA digestibility determined with the nitrogen free diet was lower than the correspondent values obtained with the EHC diet. The EHC-UF technique is considered a good alternative to the classic method for the determination of endogenous ileal flow.

Key words: Ileal flow, aminoacids, nitrogen free diet, enzimatically hydrolyzed casein, protein-free, ultrafiltration, rats.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 458 - 463, 2005

 DETERMINACIÓN DEL PROTOCOLO DE CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN CANINO: REPORTE PRELIMINAR

Determination of the Protocol for the Criopreservation of the Canine Semen:
Preliminary Report

Rafael Bohórquez Corona^{1, 2}, Aitor De Ondiz¹, Roberto Palomares¹ y Fanny Gallardo²

¹Unidad de Reproducción Animal. ²Unidad de Investigaciones Clínicas.
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. Apartado 15252, Maracaibo 4005, Venezuela. E-mail rbohorquez@luz.edu.ve

RESUMEN

Se recolectaron muestras de semen a 7 machos caninos de varias razas, a las cuales se les practicó un espermatograma completo. Aquellas muestras seminales clasificadas como óptimas fueron utilizadas para ser sometidas al proceso de criopreservación. Se procedió a congelar el semen utilizando un diluente a base de TRIS, ácido cítrico, glucosa, penicilina, estreptomicina, yema de huevo, agua destilada y glicerol. El semen fue congelado en vapores de nitrógeno líquido a 10 centímetros por encima de su nivel. El semen fue sometido a pruebas de evaluación considerándose los parámetros de volumen, color, pH, motilidad, concentración y morfología. Se realizaron pruebas de resistencia térmica en placas calentadas para el semen fresco, diluido, glicerinado y descongelado, por períodos de tiempo de 15, 30, 45, 60 y 90 minutos, obteniéndose resultados de motilidad de hasta 30% al cabo de 90 minutos. Se pudo observar la versatilidad y sencillez del uso de este dilutor y de la técnica de congelación en vapores de nitrógeno líquido para la criopreservación del semen canino.

Palabras clave: Caninos, semen congelado, dilutor, TRIS, resistencia térmica.

ABSTRACT

Semen samples of seven canine of various breeds were collected and evaluated by a complete spermatogram. Those samples classified as optimal were used to follow the freezing protocol. A TRIS buffer solution containing citric acid, glucose, penicillin, streptomycin, egg yolk, distilled water and glycerol was used to dilute and freeze the semen. The semen was frozen on liquid nitrogen vapors at 10 centimeters above the level of nitrogen. Semen volume, color, pH, sperm motility, concentration and morphology were evaluated. Thermal resistance tests were conducted for fresh, diluted, chilled and post thawed samples of semen, been observed up to 30% motility after 90 minutes. The essay probed the versatility and practicality of the use of this dilutor, and the easiness of the technique of freezing semen with vapors of liquid nitrogen.

Key words: Canine, frozen semen, dilutor, TRIS, thermal resistance.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 464 - 475, 2005

MODELOS CINÉTICOS APLICADOS AL CRECIMIENTO
DE Lactococcus lactis subsp. lactis EN LECHE

Growth Kinetics Models Applied to Lactococcus lactis subsp. lactis in Milk

 Emiro Valbuena¹, José Barreiro³, Egar Sánchez ², Gustavo Castro¹, Wilfido Bríñez¹ y Armando Tovar ¹

¹Laboratorio de Ciencia y Tecnología de la Leche. ²Unidad de Bioestadística.
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia, Apartado 15252. Maracaibo 4005-A, Venezuela.
³Departamento de Tecnología de Procesos Biológicos y Bioquímicos, Universidad Simón Bolívar.
Sartenejas, Venezuela. E-mail: evalbuena@luz.edu.ve

RESUMEN

El Lactococcus lactis subsp. lactis es una bacteria ácido-láctica muy utilizada como cultivo iniciador principalmente en quesos madurados, capaz de producir algunas bacteriocinas, entre estas la nisina, por lo cual su uso como preservador es importante. En el presente trabajo se utilizaron modelos cinéticos con el objeto de describir el crecimiento de este microorganismo en leche en polvo reconstituida, con los cuales es posible predecir su dinámica dentro del rango de temperatura estudiado, entre 9 y 39°C. Se utilizó la ecuación de Gompertz con cuatro parámetros de regresión para modelar cada una de las curvas de crecimiento obtenidas experimentalmente. Como resultado de este proceso, se obtuvieron los parámetros necesarios para calcular la fase de adaptación (l), tasa de crecimiento exponencial (µ_m) y el tiempo de generación (Tg). Estos parámetros microbiológicos fueron relacionados con la temperatura en un modelo secundario, en el cual, la fase de adaptación y el tiempo de generación fueron bien ajustados utilizando una ecuación hiperbólica, obteniendo un R² = 0,922 y 0,991 respectivamente, mientras que la tasa de crecimiento se modeló utilizando la ecuación de la raíz cuadrada de Ratkowsky (R² = 0,991). Se recomienda utilizar la metodología descrita para estudiar el crecimiento de este microorganismo en quesos frescos, incluyendo en el modelo la cinética de producción de nisina.

Palabras clave: Lactococcus lactis, microbiología predictiva, modelo de Gompertz, cinética de crecimiento.

ABSTRACT

Lactococcus lactis subsp. lactis is a lactic acid bacteria frecuently employed as a starter culture for ripened cheese. This microorganism is capable of producing several bacteriocins such as nisin, that is precisely why its use as a preservative is important. In the present work, growth kinetics models were used to describe the growth of this microorganism in reconstituted powder milk, to predict its growth dynamic within the temperature range studied (9-39°C). Gompertz equation with four regression parameters was used to model for each one of the growth curves experimentally obtained. As a result, the necessary parameters to calculate the adaptation phase, maximum rate of exponential growth and generation time were obtained. Microbiological parameters were compared with temperature in a secondary model. In this model the lag time (l), and generation time (Tg) were well adjusted using an hyperbolic equation, obtaining a R² = 0.922 and 0.991, respectively. The Ratkowsky square root equation (R² = 0.991) was used to model the growth rate (µ_m). It is recommended to use previously described methodology to study the growth of this microorganism in fresh chesses, including in the model the kinetics of nisin production.

Key words: Lactococcus lactis, predictive microbiology, Gompertz model, growth kinetics.

Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, Nº 5, 476 - 482, 2005

OPTIMIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE LA LACTASA DE Kluyveromyces marxianus ATTC 8554, PARA SU APLICABILIDAD EN LA INDUSTRIA LÁCTEA

Optimization of the Process of Extraction of Lactase From Kluyveromyces marxianus
ATTC 8554, for their Applicability in the Dairy Industry

 Xiomara Montiel, Ingrid Carruyo, Letty Marcano y Marcel Mavárez

Departamento de Biología, Facultad Experimental de Ciencias, Universidad del Zulia, Apartado 526.
Maracaibo, Estado Zulia, Venezuela. E-mail: xyo_mon@hotmail.com; xyo_mon@cantv.net.

RESUMEN

La lactasa o b-galactosidasa (EC 3.2.1.23) es una enzima exclusivamente intracelular en Kluyveromyces marxianus ATCC 8554, por lo que para su liberación existen diversos métodos de extracción. El objetivo del presente trabajo consistió en optimizar el proceso de extracción de esta enzima para su uso en la industria láctea. La producción de la enzima fue inducida mediante el crecimiento de la levadura en un medio con lactosa como única fuente de carbono por 9 horas, donde alcanzó la fase logarítmica final de crecimiento. Se evaluó la combinación de los parámetros fisicoquímicos: temperaturas 30; 37 y 42°C; pH 6,5; 8,5 y 10 y tiempo 5; 10 y 20 horas con el método de extracción con tolueno al 2% en buffer fosfato 0,1M. Se determinó la actividad enzimática de la lactasa a través del uso de un sustrato cromógeno el o-nitrophenyl-b-D-galactopyranosido (ONPG) sobre los extractos libres de células. Se determinó la cantidad de proteínas totales por el método de Lowry, que permitió la valoración de la actividad específica. Los resultados fueron analizados empleando el paquete estadístico Statgraf versión 7,0, aplicando análisis de varianza trifactorial, LSD y prueba de Tukey. El análisis por microscopía electrónica de transmisión (MET) de las células de K. marxianus reveló que el tolueno ejerce un efecto permeabilizante, liberando la enzima sin ruptura de la integridad celular. Se encontró un acortamiento significativo (P £ 0,01) en el tiempo necesario para la extracción de la lactasa, siendo la mejor combinación: 37°C, pH 6,5 y 5 horas, generando en este tiempo la mayor cantidad de ONP: 0,4937 µmoles/mL/10 min. y la mayor actividad específica 34,2095 Ub-gal/mg proteínas.

Palabras clave: Lactasa, Kluyveromyces marxianus, extracción.

ABSTRACT

The lactase or b- galactosidasa (EC 3.2.1.23) it is an exclusively intracellular enzyme in Kluyveromyces marxianus ATCC 8554, so that, to obtain it, there are several methods to the extraction. The objective of this work consisted on optimizing the process of extraction of this enzyme, and it can be its used in the dairy industry. The enzyme production was induced while yeast growth in a means with lactose as the one carbon source for 9 hours, where it reached the phase logarithmic end of growth. The physiochemical parameters combination was evaluated: temperatures 30; 37 and 42°C; pH 6.5; 8.5 and 10 and time 5; 10 and 20 hours using the extraction method with toluene to 2% in buffer phosphate 0.1M. The enzymatic activity of the lactase was determined with the use of cromogen substrate the or-nitrophenyl b-D-galactopyranoside (ONPG) on the extracts free of cells. The quantity of total proteins was determined by the method of Lowry that allowed the valuation of the specific activity. The results were analyzed using the statistical package Statgraf version 7.0, applying variance trifactorial analysis with a single effect, LSD, Tukey test. The analysis for TEM of the cells of K. marxianus revealed that the toluene produced a permeabilizant effect, liberating the enzyme without rupture of the cellular integrity. It was found that there was a significant reduction in the necessary time to the extraction of the b-D galactosidasa of the cells of K. marxianus, being the best combination: 37°C, pH 6.5 and 5 hours, generating in this time the biggest quantity in ONP: 0.4937 µmoles/mL/10 min. and the biggest specific activity 34.2095 Ub-gal/mg proteins.

Key words: Lactase, Kluyveromyces marxianus, extraction.