Введение

УДК 612.398.192:/617.58–002.18–88–092:616.13–004.6

Взаимосвязь клинических симптомов облитерирующего атеросклероза сосудов нижних конечностей и аминокислотного фонда плазмы крови

И.И.Климович, Е.М.Дорошенко

Гродненский Государственный медицинский университет МЗ Республики Беларусь, 230015, Гродно, Горького 80

Институт биохимии НАН Беларуси, г. Гродно, 230009, Гродно, БЛК-50

Abstract

The interrelationships between the symptoms of obliterating atherosclerosis of the vessels of lower limbs and plasma amino acid pool

I.I. Klimovich, Ye.M.Doroshenko

Key words: atherosclerosis, lower limbs, amino acids

Abstract

The formation of the amino acid pool in blood plasma of parients with obliterating atherosclerosis of lower limbs has been investigated.

We did not find any significant differences in the concentrations of free amino acids and their derivatives in patients differing in age, presence and degree of adiposity, circulatory insufficiency. However, patients with highest intensity of pain syndrome (pain at rest) showed higher level of urea, aromatic amino acids, lysine and leucine. Thus, chronic tissue hypoxia leads to amino acid imbalance. Apparently, shifts in the formation of amino acids pool reflect the degree of tissue hypoxia but not the adaptation capability of circulation.

Longer duration of illness was accompanied by general depletion of the amino acids pool mainly at the expense of aromatic and branched chain amino acids as well as glycine, ornithine and histidine.

As the conclusin, we can estimate the amino acid imbalance observed in atherosclerosis to be determined by the atherosclerosis itself but not the accompanying syndromes.

Введение

В фундаментальных исследованиях ОАСНК не решены главные задачи: анализ и расшифровка действия основных факторов заболевания на уровне биорегуляторных систем, рецепторов и клеток; взаимоотношения между начальными биохимическими сдвигами в организме и морфологическими процессами в сосудах; отсутствие ранних, адекватных и высокочувствительных методов диагностики, позволяющих обосновать содержание целенаправленного коррелирующего воздействия [4,6,7,21,27,33]. Кроме этого, особенностью ОАСНК является наличие хронической гипоксии больших массивов мышечной ткани, ведущее к многочисленным обменным нарушениям еще в доклинической стадии, в отличие от других локализаций атеросклеротических поражений [5].

Наш особый интерес к изучению закономерностей формирования фонда свободных аминокислот и их производных, а также метаболических процессов, определяющих эти явления, обусловлен тем, что аминокислоты являются наиболее важными соединениями, участвующими в метаболизме азота и синтезе большинства эндогенных биологически активных соединений (биорегуляторов). Непосредственно из аминокислот синтезируются структурные белки, ферменты, часть гормонов, азотистые основания, а также ряд других соединений, входящих в состав липидов [10,23,40]. Обмен этих соединений довольно жёстко контролируется различными биохимическими и физиологическими механизмами, определяющими относительно постоянные концентрации аминокислот в крови и тканях (аминокислотный фонд) [31]. Следовательно, изменениями в формировании аминокислотного пула сопровождаются практически все обменные нарушения.

Сдвиги уровней отдельных аминокислот при ОАСНК могут быть вызваны как алиментарными, физиологическими, так и метаболическими причинами [22,28,31], причем последние, возможно, играют ведущую роль. Стабильность фонда свободных аминокислот имеет весьма важное значение в реализации пластических функций клетки, особенно - в биосинтезе белка и регуляторных пептидов [25,31]. Кроме того, сами аминокислоты и их дериваты часто выступают в роли аллостерических регуляторов, нейротрансмиттеров или их предшественников [22,24,31,39].

Цель работы: выяснить роль нарушений в формировании аминокислотного фонда в патогенезе облитерирующего атеросклероза сосудов нижних конечностей.

В настоящее время существует около 100 классификаций облитерирующего атеросклероза нижних конечностей [2]. Наиболее распространенной считается четырёхстадийная морфологическая классификация [16], однако, наряду со стадией морфологических изменений считается важным учитывать степень хронической артериальной недостаточности [16], так как не всегда анатомические изменения в магистральных артериях соответствуют тяжести функциональных нарушений кровотока в нижних конечностях.

Степень хронической артериальной недостаточности в основном отражает адекватность коллатерального кровотока и выраженность микроциркуляторных расстройств в определённом сегменте конечности [20,21].

Классификация В.И.Бураковского, которой мы пользуемся в настоящей работе [16], учитывает как наличие хронической артериальной недостаточности, так и выраженность анатомических и функциональных изменений сосудистой стенки. Диагностика стадий заболевания и степени ишемии основывается на применении таких высокоинформативных методов исследования, как ангиография, функциональная реовазография, доплерометрия и доплерография [15,16,19].

Известно, что атеросклероз является патологией обмена веществ, включая обмен липидов, белков и углеводов [9], причем ведущая роль нарушений обмена липидов, в частности, при поражениях сосудов нижних конечностей, поставлена под сомнение [18,29]. Преимущественная выраженность нарушений липидного обмена характерна для поздних стадий атеросклероза и, очевидно, носит вторичный характер [9]. При этом нарушается липолитическая активность сосудистой стенки, нервно-эндокринная регуляция и функции печени [8,9].

Материалы и методы

Характеристика клинических исследований

Обследовано 411 больных, из них 359 мужчин и 52 женщин с 1990 по 1997 гг. Общая характеристика больных представлена в таблицах 1—3.

Таблица 1

Распределение обследованных больных по стадиям заболевания

		Стадия ОАСНК
		I	II	III	IV	Всего
кол-во больных		41	252	54	64	411
Пол	м	32	235	44	48	359
	ж	9	17	10	16	52
Возраст	31-40 лет	0	2	0	0	2
	41-59 лет	25	87	15	15	142
	60 и более лет	16	163	39	49	267
Койко-дни (средние)		17,4	19	26,6	28,5	22,9

Таблица 2

Распределение обследованных больных в зависимости от основных перенесенных и сопутствующих заболеваний и оперативных вмешательств

	Стадия ОАСНК
	I	II	III	IV
Перенесенные заболевания и оперативные вмешательства:
инфаркт миокарда	3	13	0	1	17
операция шунтирования	0	20	10	3	33
симпатэктомия	0	2	0	1	3
ампутации	0	0	3	16	19
интимтромбэктомия	0	2	0	1	3
резекция желудка	0	15	1	1	17
инфаркт миокарда и инсульт	0	3	0	2	5
инсульт	1	11	2	3	17
прочие	17	129	11	9	166
Сопутствующие заболевания:
язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки	1	22	1	3	27
сахарный диабет
есть	1	37	9	13	60
нет	40	215	45	51	351

Таблица 3

Распределение обследованных больных в зависимости от наличия или отсутствия ИБС, гипертонической болезни или ожирения

Стадия		1	2	3	4	Всего
ИБС	есть	8	120	30	57	215 (52,3%)
	нет	33	132	24	7	196 (47,7%)
Гипертоническая болезнь	есть	5	48	26	32	111 (27,0%)
	нет	36	204	28	32	300 (73,0%)
Ожирение	есть	3	8	5	7	23 (5,6%)
	нет	38	244	49	57	388 (94,4%)

В диагностике ОАСНК использовали данные общеклинического обследования, реовазографии (реовазографический индекс), УЗИ сосудов (наличие зон окклюзий, прослушивание шума), ангиографии (изъеденность контуров артерий, их сужение или полная облитерация), а также все стандартные лабораторные и биохимические показатели, определяемые в клинике.

I стадия заболевания отмечена у 41 больного (32 мужчины, 9 женщин). В возрасте 41-59 лет было 25 пациентов и старше 60 лет – 16. Сроки лечения этих больных в стационаре составили 17,4 койко-дня.

II стадия заболевания имелась у 252 больных (235 мужчин и 17 женщин), до 40 лет было 2 больных, 41-59 лет – 87, старше 60 лет – 163. Длительность лечения у этой категории больных составила 19 койко-дней. С III стадией болезни лечилось 54 больных, из них 44 мужчины и 10 женщин, в возрасте 41-59 лет – 15 пациентов и свыше 60 лет – 39 больных. Сроки лечения этой категории больных составили 26,6 койко-дня. IV стадия болезни имелась у 64 больных (48 мужчин и 16 женщин). В возрасте 41-59 лет было 15 пациентов и старше 60 лет – 49 больных.

Контрольные группы были сформированы из 109 доноров станции переливания крови, от которых получена плазма для определения уровня свободных аминокислот и их производных.

Всего обследовано 520 человек.

Анализ аминокислот в плазме крови и периферических тканях.

Плазму получали путем центрифугирования крови в течение 15 минут при 1500 об/мин. Для депротеинизации к 0,5 мл плазмы добавляли равный объем 1M НСlО₄ (в качестве внутреннего стандарта в нее добавляли норлейцин из расчета 1250 нмоль/мл) и центрифугировали в течение 15 минут при 8000 об/мин. После этого для нейтрализации добавляли 5 M цитратный буфер (57 г водного цитрата лития х 4H₂O, 42г лимонной кислоты на 200 мл раствора) из расчета 150 m л на 1мл полученного образца [12].

Полученные таким образом безбелковые экстракты для определения фонда свободных аминокислот хранилось в течение всего времени до анализа при температуре -20°С [12,14].

Определение содержания свободных аминокислот и их дериватов проводилась катионообменной хроматографией одноколоночным методом на автоанализаторе аминокислот Т-339 (Чехия) по модифицированному методу Benson J.V., Paterson J.A. (1974) [14,36], принцип которого заключается в элюции аминокислот и родственных соединений ступенчатым градиентом Li-цитратных буферных растворов [1,34]. После нанесения кислотного экстракта физиологических жидкостей или тканей на аналитическую колонку (22,0 х 0,35 см), заполненную сферическим катионообменником LGAN 2B (размер частиц 8 мкм) ("Lachema", ЧСФР) хроматографическое разделение исследуемых соединений последовательно осуществлялось Li-цитратными буферами (состав — см. табл. 2.6). Скорость потока растворов 14 мл/час, давление на колонке 2,5-3,5 МПа. Температура анализа дискретно повышалась в середине аналитического цикла с 40 до 62°С. Количественное содержание каждого компонента спектра исследуемых соединений оценивалось по реакции с 1% раствором нингидрина (скорость потока 12 мл/час) в капиллярной бане при 100°С при длине волны 520 нм после прохождения через проточную кювету однолучевого фотометра [11,13].

Сигнал с выхода фотометра поступал на программно-аппаратный комплекс "МультиХром-1", где происходила регистрация, обработка, идентификация пиков и вычисление концентраций по площадям пиков. Качественная идентификация и количественная оценка полученных значений производилась программой путем сравнения результатов анализа исследуемых биологических объектов со стандартной калибровочной кривой искусственной смеси аминокислот, в которую добавляли в той же концентрации норлейцин (концентраты стандартных смесей фирмы "Calbiohem", США). Реагенты готовились из коммерческих комплектов для определения свободных аминокислот ("Lachema", ЧСФР) на деионизованной воде, которая перед использованием была подвергнута двойной дистилляции.

Результаты и их обмуждение

В плазме крови нами не было обнаружено достоверных различий в концентрации свободных аминокислот и их производных в зависимости от возраста больных (табл. 4)

Таблица 4

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от возраста, m М

	41–59 лет n=88	60 лет и более n=128
CA	30,5 ± 12,4	24,04 ± 4,26
Tau	184,4 ± 60,7	214,1 ± 29,1
PEA	22,7 ± 15,2	17,73 ± 5,19
Мочевина	388,9 ± 81,7	473,9 ± 57,2
Asp	45,5 ± 15,0	30,87 ± 4,53
Thr	111,6 ± 15,6	123,24 ± 9,13
Ser	111,9 ± 15,8	113,72 ± 7,64
Asn	49,5 ± 18,1	48,90 ± 7,36
Glu	175,9 ± 30,2	179,3 ± 17,0
Gln	416,3 ± 84,0	533,6 ± 52,1
Pro	393,6 ± 83,1	446,3 ± 44,5
Gly	268,7 ± 37,0	274,2 ± 20,9
Ala	538,4 ± 81,2	568,4 ± 43,1
aAba	48,4 ± 12,1	57,0 ± 12,8
Val	289,7 ± 34,7	318,5 ± 26,3
Cys	49,7 ± 33,8	26,1 ± 10,9
Met	34,3 ± 13,2	25,76 ± 4,12
Ctn	45,1 ± 41,0	22,7 ± 12,3
Ile	90,9 ± 15,1	94,26 ± 9,08
Leu	156,6 ± 19,8	161,6 ± 13,1
Tyr	63,9 ± 11,8	61,51 ± 5,20
Phe	60,8 ± 13,0	58,23 ± 4,97
b Ala	251 ± 140	67,6 ± 42,1
EA	85,5 ± 12,3	98,57 ± 8,40
NH₃	833 ± 105	838,2 ± 65,3
Orn	123,0 ± 20,8	116,0 ± 10,4
Lys	171,3 ± 20,7	171,9 ± 12,4
His	96,7 ± 13,9	93,18 ± 7,14

Не было также обнаружено зависимости характера аминокислотного фонда плазмы крови от наличия и степени ожирения (табл. 5). Данные по другим стадиям ожирения не приведены вследствие малочисленности наблюдений.

Таблица 5

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от наличия ожирения, m М

	нет n=205	II степени n=5
CA	25,47 ± 4,51	27,4 ± 12,4
Tau	193,3 ± 24,9	239 ± 37,7
PEA	17,97 ± 5,56	37,8 ± 13,5
Мочевина	447,8 ± 49,1	495 ± 112,4
Asp	34,52 ± 5,13	39,51 ± 5,40
Thr	118,29 ± 7,96	170,5 ± 46,0
Ser	111,48 ± 7,00	155,8 ± 30,9
Asn	48,27 ± 7,31	76,29 ± 7,88
Glu	178,9 ± 15,2	222,6 ± 30,6
Gln	489,2 ± 45,1	711 ± 166
Pro	432,8 ± 40,3	502 ± 112
Gly	269,9 ± 18,3	363 ± 115
Ala	557,7 ± 39,1	649 ± 141
aAba	55,5 ± 10,5	50,56 ± 8,47
Val	309,0 ± 22,3	379,1 ± 85,5
Cys	30,9 ± 11,3	Нет данных
Met	27,38 ± 4,50	34,17 ± 9,66
Ctn	28,2 ± 13,1	9,34 ± 3,52
Ile	92,63 ± 7,94	109,4 ± 44,2
Leu	159,9 ± 11,4	175,7 ± 38,8
Tyr	61,23 ± 4,99	78,68 ± 4,23
Phe	59,06 ± 4,95	58,4 ± 11,9
b Ala	119,4 ± 51,3	нет данных
EA	93,69 ± 7,06	151,7 ± 39,4
NH₃	828,3 ± 56,3	1180 ± 221
Orn	117,29 ± 9,51	133,5 ± 48,8
Lys	171,6 ± 10,9	176,6 ± 54,8
His	93,19 ± 6,53	93,4 ± 25,1

Недостаточность кровообращения не оказывала статистически достоверного влияния на аминокислотный спектр плазмы крови (табл. 6).

Таблица 6

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от наличия и степени недостаточности кровообращения, m М

	нет n=72	I степень n=84	II степень n=40	III степень n=20
CA	28,34 ± 5,97	22,36 ± 5,16	15,05 ± 2,84	14,27 ± 7,14
Tau	213,3 ± 32,6	243,8 ± 87,5	161,3 ± 19,6	87,9 ± 31,5
PEA	22,53 ± 7,60	13,54 ± 5,11	8,77 ± 1,34	3,483 ± 0,071
Мочевина	446,1 ± 57,1	499 ± 142	449 ± 138	377 ± 179
Asp	39,82 ± 6,74	20,82 ± 3,90	24,77 ± 3,49	15,4 ± 10,0
Thr	122,87 ± 9,55	118,7 ± 23,0	113,4 ± 16,1	92,7 ± 42,6
Ser	115,08 ± 8,45	111,7 ± 20,6	112,48 ± 8,92	84,8 ± 37,2
Asn	57,37 ± 9,80	31,9 ± 10,3	32,37 ± 8,73	36,9 ± 15,2
Glu	195,5 ± 19,3	146,2 ± 25,7	158,9 ± 24,8	92,1 ± 41,3
Gln	494,4 ± 54,7	580 ± 104	477 ± 149	414 ± 144
Pro	454,7 ± 50,9	401,9 ± 66,1	379,1 ± 67,8	288 ± 155
Gly	289,9 ± 22,1	222,6 ± 45,9	244,1 ± 44,5	205,0 ± 81,2
Ala	591,3 ± 49,0	472,0 ± 52,0	528,9 ± 83,7	394 ± 180
a Aba	49,55 ± 6,16	107,0 ± 67,4	37,26 ± 6,49	24,4 ± 11,7
Val	325,5 ± 27,1	287,1 ± 52,7	287,6 ± 52,0	192,5 ± 75,9
Cys	36,1 ± 16,6	31,2 ± 14,8	15,50 ± 7,78	12,6 ± 10,0
Met	30,33 ± 6,01	19,03 ± 3,31	24,28 ± 4,48	17,88 ± 8,13
Ctn	25,7 ± 14,2	Нет данных	4,90 ± 1,57	Нет данных
Ile	98,65 ± 9,65	95,3 ± 21,6	61,4 ± 10,4	70,7 ± 32,8
Leu	171,0 ± 14,1	136,6 ± 19,3	129,5 ± 20,7	122,8 ± 56,5
Tyr	65,32 ± 6,26	56,9 ± 10,3	53,03 ± 7,30	42,5 ± 14,2
Phe	62,96 ± 6,33	44,58 ± 5,65	56,93 ± 9,18	39,6 ± 16,3
b Ala	115,7 ± 58,8	Нет данных	9,25 ± 2,46	Нет данных
EA	99,25 ± 8,60	91,0 ± 19,8	89,7 ± 17,4	59,5 ± 21,1
NH₃	875,9 ± 68,8	767 ± 149	793,9 ± 94,5	641 ± 172
Orn	126,9 ± 11,6	105,7 ± 23,9	89,8 ± 17,4	72,3 ± 28,5
Lys	180,4 ± 13,2	151,2 ± 21,0	143,8 ± 24,4	152,0 ± 64,0
His	96,60 ± 7,74	90,6 ± 16,1	87,6 ± 17,7	70,4 ± 26,4

Наличие недостаточности регионарного кровотока, которое связано с появлением болевого синдрома, оказывает влияние на формирование аминокислотного фонда. Так, у больных с наиболее выраженным болевым синдромом (в покое) отмечалось более высокое содержание мочевины, а также ароматических аминокислот, лизина и лейцина (табл. 7). Повышение содержания ароматических аминокислот не связано со снижением антитоксического индекса Фишера, так как имелась тенденция к повышению и концентраций аминокислот с разветвленной углеводородной цепью (хотя для валина и изолейцина оно не было статистически достоверным). В целом наблюдавшаяся тенденция к обогащению пула исследованных соединений может объясняться наличием катаболической реакции, связанной с выраженной гипоксией тканей и распадом мышечного белка [35,37].

Таким образом, хроническая гипоксия тканей приводит к развитию аминокислотного дисбаланса. Однако, если оценивать функциональные резервы компенсации по такому показателю, как дистанция возможной безболевой ходьбы, то нами не было обнаружено достоверных различий между группами (табл. 8). Очевидно, сдвиги в формировании аминокислотного фонда отражают не адаптационные резервы кровообращения, а степень выраженности гипоксии тканей.

Нами был обнаружен ряд сдвигов в фонде свободных аминокислот в зависимости от давности заболевания (табл. 9). Отсутствие достоверных изменений по отношению к группе больных с давностью заболевания менее 1 года объясняется малочисленностью этой группы. У больных с давностью заболевания более 5 лет наблюдалась тенденция к снижению уровня таурина и достоверное снижение его основного предшественника – цистеиновой кислоты. Кроме этого, при большей длительности заболевания отмечалось общее обеднение аминокислотного пула в основном за счет аминокислот с разветвленной углеводородной цепью, ароматических аминокислот, а также глицина, орнитина и гистидина. Таким образом, вне зависимости от степени функциональной компенсации, сама по себе давность заболевания сопровождается развитием выраженного аминокислотного дисбаланса, причем его характер противоположен таковому, наблюдающемуся при выраженном болевом синдроме. Учитывая большую степень недостаточности регионарного кровотока у больных с большей давностью заболевания, логично предположить, что аминокислотный дисбаланс, обусловленный длительным прогрессированием атеросклероза, является более выраженным, чем следует из данных табл. 9.

Таблица 7

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от выраженности болевого синдрома, m М

	при быстрой ходьбе n=169	при обычной ходьбе n=25	в покое n=17
CA	20,42 ± 4,56	27,35 ± 5,69	21,44 ± 6,08
Tau	216 ± 105	207,9 ± 31,3	187,7 ± 35,9
PEA	16,57 ± 7,50	21,20 ± 7,28	10,04 ± 2,27
Мочевина	498 ± 20,6	406,9 ± 50,3	699,5 ± 78,4‡
Asp	32,6 ± 10,1	36,15 ± 6,31	28,88 ± 5,20
Thr	101,0 ± 21,0	122,09 ± 9,44	127,1 ± 19,9
Ser	103,3 ± 16,9	110,95 ± 8,23	136,7 ± 19,5
Asn	26,3 ± 11,7	53,16 ± 9,28	45,5 ± 11,2
Glu	176,3 ± 38,3	188,1 ± 18,3	146,4 ± 26,0
Gln	347 ± 131	505,6 ± 52,5	567 ± 119
Pro	307,5 ± 47,0	437,3 ± 44,2	533 ± 172
Gly	214,2 ± 36,8	279,1 ± 21,4	296,5 ± 57,0
Ala	416,5 ± 41,1	579,0 ± 47,8	581,0 ± 75,5
a Aba	30,20 ± 4,49	61,8 ± 13,3	39,92 ± 7,65
Val	212,7 ± 31,9	319,8 ± 26,4	343,9 ± 53,6
Cys	8,29 ± 6,51	32,6 ± 14,0	37,5 ± 16,0
Met	20,09 ± 3,67	29,19 ± 5,65	25,45 ± 2,99
Ile	64,6 ± 17,0	97,87 ± 9,48	101,1 ± 20,0
Leu	105,1 ± 14,9	168,5 ± 13,7	168,9 ± 23,7†
Tyr	42,55 ± 5,66	64,80 ± 6,20	64,65 ± 4,15†
Phe	35,51 ± 4,71	62,02 ± 6,09	60,59 ± 5,45†
b Ala	9,511 ± 0,193	167,6 ± 69,0	9,74 ± 3,54
EA	78,7 ± 17,5	97,59 ± 8,38	88,9 ± 18,2
NH₃	679 ± 141	860,7 ± 67,4	812 ± 131
Orn	87,0 ± 20,7	123,2 ± 11,4	118,0 ± 22,4
Lys	114,2 ± 12,7	177,2 ± 13,0	199,0 ± 22,2†
His	67,3 ± 11,3	95,49 ± 7,69	108,0 ± 16,3

p<0.05 при сравнении с группами: † – при быстрой ходьбе, ‡ – при обычной ходьбе.

Таблица 8

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от дистанции возможной безболевой ходьбы, m М

	более 500 м n=137	от 200 до 500 м n=44	менее 100 м n=35
CA	23,84 ± 8,34	28,01 ± 6,74	21,02 ± 3,73
Tau	294 ± 125	216,5 ± 39,2	181,3 ± 26,3
PEA	12,82 ± 5,26	24,99 ± 9,02	10,71 ± 1,49
Мочевина	464 ± 196	417,1 ± 55,4	526 ± 113
Asp	30,23 ± 8,45	35,11 ± 7,04	34,82 ± 8,37
Thr	97,9 ± 19,3	122,7 ± 10,9	121,0 ± 14,1
Ser	101,8 ± 21,6	108,94 ± 8,69	124,6 ± 14,4
Asn	63,7 ± 30,1	50,3 ± 10,3	43,06 ± 9,73
Glu	196,3 ± 68,5	180,1 ± 20,0	184,4 ± 25,2
Gln	407 ± 130	532,8 ± 60,8	462,6 ± 85,3
Pro	505,7 ± 88,4	431,3 ± 52,6	441,1 ± 76,5
Gly	255,1 ± 47,6	267,6 ± 23,9	293,7 ± 36,0
Ala	583 ± 124	556,4 ± 51,3	582,6 ± 70,6
a Aba	38,09 ± 5,87	65,0 ± 16,2	41,48 ± 4,73
Val	360,4 ± 89,5	300,0 ± 27,0	342,0 ± 46,6
Cys	Нет данных	37,5 ± 15,8	14,63 ± 8,18
Met	17,16 ± 3,75	30,54 ± 6,83	24,35 ± 3,14
Ctn	Нет данных	40,3 ± 19,2	5,27 ± 1,19
Ile	104,3 ± 28,3	93,8 ± 10,8	92,7 ± 13,3
Leu	154,5 ± 37,6	158,7 ± 14,8	170,8 ± 20,2
Tyr	57,4 ± 14,5	64,53 ± 7,26	59,61 ± 5,57
Phe	43,62 ± 8,33	60,77 ± 7,21	60,87 ± 5,99
b Ala	Нет данных	167,8 ± 68,9	8,98 ± 2,62
EA	146,6 ± 35,8	94,63 ± 9,03	91,7 ± 12,7
NH₃	1145 ± 250	793,1 ± 64,5	912 ± 124
Orn	111,6 ± 34,5	117,4 ± 11,7	125,5 ± 20,1
Lys	163,9 ± 42,4	167,6 ± 14,3	184,1 ± 18,0
His	75,2 ± 16,3	96,44 ± 8,75	92,4 ± 11,4

Таблица 9

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК при поступлении в зависимости от давности заболевания, m М

	до 1 года n=19	до 5 лет n=104	более 5 лет n=93
CA	20,21 ± 3,73	36,03 ± 9,20	15,97 ± 1,97*
Tau	145,0 ± 20,9	252,2 ± 47,7	174,9 ± 33,0
PEA	7,09 ± 1,39	27,1 ± 10,8	12,69 ± 2,91
Мочевина	553 ± 143	406,7 ± 70,5	466,4 ± 71,9
Asp	26,68 ± 9,48	45,8 ± 10,0	24,84 ± 3,17
Thr	107,8 ± 11,4	136,6 ± 13,4	105,5 ± 10,4
Ser	104,4 ± 10,7	124,8 ± 11,9	103,51 ± 9,26
Asn	32,19 ± 8,68	60,9 ± 14,2	42,03 ± 6,76
Glu	140,3 ± 32,5	212,0 ± 25,9	157,0 ± 17,8
Gln	512 ± 108	555,4 ± 74,4	438,0 ± 60,8
Pro	335,6 ± 57,2	512,1 ± 64,7	376,7 ± 54,9
Gly	259,2 ± 35,4	324,0 ± 28,8	223,9 ± 24,7*
Ala	508,6 ± 77,6	611,8 ± 63,9	517,4 ± 51,6
a Aba	30,68 ± 5,76	59,53 ± 9,09	55,8 ± 20,4
Val	256,8 ± 30,1	359,0 ± 36,2	274,6 ± 29,9
Cys	24,31 ± 7,23	55,9 ± 32,6	16,77 ± 4,76
Met	17,38 ± 2,09	36,46 ± 9,10	20,83 ± 2,32
Ile	76,0 ± 13,4	111,4 ± 13,4	78,18 ± 9,76*
Leu	131,0 ± 16,2	189,3 ± 18,8	137,4 ± 14,3*
Tyr	50,74 ± 4,42	72,60 ± 9,26	53,82 ± 5,00
Phe	48,16 ± 6,01	71,24 ± 9,46	49,28 ± 4,45*
EA	76,9 ± 14,4	108,6 ± 11,6	86,52 ± 9,66
NH₃	878 ± 234	941,8 ± 81,1	721,8 ± 71,2*
Orn	113,6 ± 14,6	139,9 ± 17,1	96,2 ± 10,3*
Lys	155,4 ± 17,4	186,8 ± 17,2	159,6 ± 15,5
His	100,1 ± 12,7	106,6 ± 11,4	79,18 ± 7,36*

* – p<0.05 при сравнении с группой до 5 лет.

В I стадии заболевания нами зарегистрировано повышение уровня цистеата, не сопровождающееся повышением содержания таурина, снижение содержания серина, аспарагина и глутамина (хотя концентрация глутамата была выше контрольных цифр) (табл. 10). Содержание пролина было повышено, этаноламина и аммиака, а также гистидина – снижено. Снижение содержания этаноламина можно объяснить снижением содержания его основного предшественника – серина [10]. В этой стадии еще не наблюдалось определенного преобладания дефицита гликогенных аминокислот. Однако, можно предполагать функциональный дефицит таурина, исходя из повышения содержания его предшественника [11,30], а также снижение относительной значимости синтеза глутамина и аспарагина в обезвреживании аммиака.

Так как содержание свободных аминокислот в тромбоцитах и плазме крови существенно различается, причем практически все аминокислоты, кроме глутамина, присутствуют в тромбоцитах в более высокой концентрации [38], несомненно наличие компартментализации свободных аминокислот в тромбоцитах и механизмов поддержания градиента их концентрации. Нарушение структуры тромбоцитов при адгезии и агрегации, следовательно, должно приводить к локальному выходу части свободных аминокислот, что может быть одним из факторов, провоцирующих сосудистый спазм или запуск системы плазменного гемостаза.

Во II стадии снижение аспарагина и глутамина сохранялось, причем концентрация последнего соединения была достоверно ниже, чем при I стадии. Однако, содержание аммиака возвращалось к контрольным значениям. Кроме этого, во II стадии отмечалось повышение концентрации цистатионина (табл. 10). Остальные сдвиги сохраняли ту же направленность, что и в I стадии.

В III стадии направленность метаболических сдвигов сохранялась, однако, вновь снижалась концентрация аммиака, а также отмечался выраженный подъем концентрации цистеата. Это подтверждает наличие функционального дефицита таурина. Сохранялось также обнаруженное при II ст. повышение концентрации цистатионина (табл. 11).

Таблица 10

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК I и II стадий, m М

	Контрольная	I стадия	II стадия
	группа n=109	n=26	n=135
CA	17,376±0,614	28,08±5,74a	22,32±1,99
Tau	358,7±16,4	298,7±86,5	369±14,8
PEA	Нет данных	259,2±96,5	192,8±43,9
Мочевина	833,9±46,4	1053±46,6	830±6,53
Asp	54,66±7,98	25,80±5,75	91,2±4,98
Thr	231,6±11,1	229,2±34,0	167,4±42,2
Ser	299,9±16,1	176,4±27,2a	191,6±59,8
Asn	165,8±12,1	60,65±8,72a	61,39±7,09a
Glu	165,4±12,3	309±119a	297±11,0a
Gln	1734,8±60,3	923,3±49,5a	352±16,2ab
Pro	325,6±21,3	589±110a	449±75
Gly	461,8±26,4	402±113	448±45
Ala	1171,7±52,6	657±111a	608±157a
a Aba	43,68±3,12	58,9±11,5	42,2±16,4
Val	471,1±28,7	410,8±84,3	341,1±76,3
Cys	86,12±3,71	Нет данных	49,2±12,6
Met	44,18±4,56	39,55±9,56	43,2±12,7
Ctn	4,771±0,291	Нет данных	14,85±0,706a
Ile	129,3±13,2	136,5±35,0	93,1±18,9
Leu	211,4±19,7	265,1±56,9	199,4±45,6
Tyr	92,59±6,32	97,6±23,7	74,67±9,64
Phe	96,14±6,00	87,8±21,1	84,1±25,0
EA	145,90±7,64	82,4±30,6a	90,3±26,7a
NH₃	1754,9±88,2	857±214a	1323±244
Orn	181,1±11,6	141,6±31,7	198,9±54,5
Lys	303,6±18,3	256,6±50,7	215,7±76,3
His	272,6±13,6	134,9±24,0a	118,49±6,72a

p<0.05 при сравнении с группами: a - контрольная группа, b - I стадия

Таблица 11

Содержание свободных аминокислот и родственных соединений в плазме крови больных ОАСНК III и IV стадий, m М

	Контрольная	III стадия	IV стадия
	группа n=109	n=26	n=29
CA	17,376 ± 0,614	42,08 ± 8,75a	14,82 ± 4,05
Tau	358,7 ± 16,4	343,7 ± 67,9	117,8 ± 15,2a
PEA	Нет данных	298 ± 83	Нет данных
Мочевина	833,9 ± 46,4	629 ± 129	351 ± 64a
Asp	54,66 ± 7,98	49,2 ± 11,9	25,17 ± 4,70a
Thr	231,6 ± 11,1	182,2 ± 31,1	46,0 ± 10,6ab
Ser	299,9 ± 16,1	201,7 ± 14,6a	52,76 ± 4,67ab
Asn	165,8 ± 12,1	76,0 ± 15,6a	Нет данных
Glu	165,4 ± 12,3	179,64 ± 6,82	344,7 ± 33,2ab
Gln	1734,8 ± 60,3	474,61 ± 7,45a	263 ± 23ab
Pro	325,6 ± 21,3	693,6 ± 15,4a	375,4 ± 56,8b
Gly	461,8 ± 26,4	532,0 ± 32,3	298,9 ± 32,0ab
Ala	1171,7 ± 52,6	760,3 ± 86,0a	225 ± 106ab
aAba	43,68 ± 3,12	61,77 ± 2,80	Нет данных
Val	471,1 ± 28,7	548,5 ± 66,4	217,2 ± 43,5ab
Cys	86,12 ± 3,71	14,19 ± 2,65a	20,96 ± 8,43a
Met	44,18 ± 4,56	22,64 ± 5,13a	11,31 ± 0,153ab
Ctn	4,771 ± 0,291	18,28 ± 7,40a	Нет данных
Ile	129,3 ± 13,2	121,3 ± 34,1	39,65 ± 5,94ab
Leu	211,4 ± 19,7	237,3 ± 13,4	90,08 ± 6,45ab
Tyr	92,59 ± 6,32	75,06 ± 3,97	29,5 ± 14,9ab
Phe	96,14 ± 6,00	75,48 ± 4,09	35,1 ± 11,8ab
EA	145,90 ± 7,64	51,9 ± 32,0a	50,3 ± 15,4a
NH₃	1754,9 ± 88,2	1084 ± 278a	592 ± 186a
Orn	181,1 ± 11,6	170,0 ± 48,4	46,3 ± 11,2ab
Lys	303,6 ± 18,3	252,59 ± 8,02	87,4 ± 27,8ab
His	272,6 ± 13,6	146,4 ± 31,6a	57,7 ± 24,6a

p<0.05 при сравнении с группами: a - контрольная группа, b - III стадия

Наконец, при IV ст. наблюдалось выраженное общее обеднение пула за счет преимущественно гликогенных аминокислот (табл. 11). Концентрация цистеата не отличалась от контрольных значений, а таурина – снижалась более чем в 3 раза. Это свидетельствует о том, что функциональная (относительная) недостаточность таурина становится абсолютной и обусловленной дефицитом предшественника [11,32]. Существенно сниженными оказались также концентрации цистина и метионина, что подтверждает этот вывод.

Обращает на себя внимание, что при IV стадии снижалась концентрация не только аммиака, но и мочевины, хотя по отношению к концентрации остальных определяемых соединений концентрация аммиака увеличивалась. Исходя из этого факта, можно утверждать о превалировании катаболизма белка и свободных аминокислот [17,26], несмотря на сниженную (в абсолютных значениях) концентрацию аммиака.

Повышение содержания пролина было выражено в I-III стадиях заболевания, однако, исчезало в IV стадии (табл. 10-11). Вероятно, это объясняется деградацией соединительной ткани у этих больных. Кроме этого, содержание аланина было снижено у всех больных, особенно в IV стадии. Это может быть связано с ограничением двигательной активности [3].

Таким образом, исследованиями у 411 больных показано, что облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей характеризуется выраженным аминокислотным дисбалансом в плазме крови (табл. 10-11), проявляющимся значительным обеднением пула определяемых соединений в основном за счёт гликогенных (глутамат, аланин, серин) и серусодержащих (цистеиновая кислота, цистеин, метионин и таурин), выраженность которого зависит от стадии заболевания.

Литература

1. Бенсон Дж. В., Патерсон Дж.А. Хроматографический анализ аминокислот и пептидов на сферических смолах и его применение в биологии и медицине. // Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков / Под ред. Ю.А. Овчинникова. — М., 1974. С. 9-84.

2. Виноградов В.В., Пауткин Ю.Ф.// Окклюзионные заболевания артерий нижних конечностей.— М., 1985.— 86с.

3. Власова Т.Ф., Мирошникова Е.В., Ушаков А.С. Влияние ограничения двигательной активности на уровне аланина в плазме крови человека. // Космич. биолог. и авиакосм. мед. - 1985. - №6. - С. 37-40.

4. Возможности радионуклидных методов исследования в комплексной оценке состояния ишемизированного сегмента конечности / Зозуля А.А., Цапенко М.В., Паламар Б.И., Одерий И.А. // Клін.Хір. 1994, №7.—С.24-27.

5. Гришин И.Н., Савченко А.Н Клиническая ангиология и ангиохирургия // Минск, 1980.— 200с.

6. Зыков Д.В. Диагностика и коррекция тромбоопасности у больных с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей при амбулаторном и стационарном лечении: Автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.27 / Сиб. гос. мед. ун-т. - Томск, 1992. - 23 с.

7. Использование тредмил-теста в диагностике и лечении хронической артериальной недостаточности нижних конечностей (обзор литературы) / Затевахин И.М., Цициашвили М.Ш., Золкин В.Н., Юдин Р.Ю. // Ангиология и сосудистая хирургия, 1997, №1, С.144-145.

8. Истомин Н. П., Соколов М. Э., Рязанова Т. Г. Воспаление как стадия развития атеросклеротического поражения периферических сосудов // Научные достижения в практическую работу: [Сб. ст.] / Клинич.больница 119, Ин-т повышения квалификации руководящих работников и специалистов; Редкол.: Л. Ф. Кравченко - гл. ред. и др. - М, 1992. - 172-174

9. Климов А.Н., Никульчева Н.Г.. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. СПб., 1995.— 298с.

10. Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах: Пер. с англ. - М., Мир. 1981. - 216с.

11. Нефёдов Л.И. Формирование фонда свободных аминокислот и их производных в условиях метаболического дисбаланса, автореф. дисс.докт. мед. наук, Минск, 1993, 34с.

12. Нефедов Л.И. Хроматографические методы изучения метаболизма серусодержащих аминокислот // Теория и практика хроматографии: Тез. - Куйбышев, 1984.- С. 165 - 166.

13. Нефедов Л.И., Климович И.И., Мороз А.Р. Статистический анализ структуры аминокислотного пула плазмы крови доноров // Здравоохранение Беларуси. - 1991. - №11. - С. 10 - 13.

14. Нидервайзер А., Патаки Дж. Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков: Пер. с англ. — М., Мир, 1974. — 462с.

15. Проблемы атеросклероза // Сб.научн.трудов под ред. Е.И.Чазова.— М.,1991, 152с.

16. Сердечно-сосудистая хирургия: (руководство) / Бураковский В.И., Бокерия Л.А., Бухарин В.А. и др.; под ред. В.И.Бураковского, Л.А.Бокерия.— М., 1989.— 750 с.

17. Синдром эндогенной интоксикации у больных поздними стадиями облитерирующего атеросклероза сосудов нижних конечностей / Дубикайтис А.Ю., Белоцерковский М.В., Конюхова С.Г., Страшнов В.И. // Бюлл.Эксп.биол.мед.—1993.—Т.115, №2.—С.148-151

18. Хирургические проблемы профилактики атеросклеротических окклюзирующих заболеваний нижних конечностей в Витебской области / В.В. Аничкин, В.А. Беляев, Д.В. Шиленок, Е.В. Кузнецов, А.С. Карпицкий // Проблемы профилактической медицины: Сб. науч. тр. - Витебск, 1995. - C. 72-73.

19. Чазов Е.И. Эволюция методов диагностики сердечно-сосудистых заболеваний // Мед. новости.— 1995.— №1.— С.6-10.

20. Шалимов А.А., Дрюк К.Ф. Хирургия аорты и магистральных артерий. — Киев: Здоров`я, 1979.— 384с.

21. Шанина Е.Ю. Оценка состояния дистального артериального русла у больных облитерирующим атеросклерозом по данным ультразвуковых методов исследования.: [Докл.] Международной конференции “Актуальные вопросы ультразвуковой диагностики”. М., 19-21 марта 1997 г. // Ультразвуковая диагностика, 1997, №2 С.42-43.

22. Amino Acids (Chemistry, Biology, Medicine) / Ed. Lubec C., Rosental J.A. — N.Y.: Escom, 1990. — 1196 p.

23. Amino Acids: Metabolism and Medical Applications / Ed. by G.L. Blackburn et al. — Boston: Wright PSG, 1983. — 520 P.

24. Beriozov T.T. Metabolism of amino acids in normal tissues and tumors - Moscow: Mеdicina. 1969. - 224p.

25. Blackburn G.L., Grant J.P., Yoring V.R. Amino Acid Metabolism and medical applications. — London: J. Wright Inc., 1983. — 520 p.

26. Bumba J., Novak K., Kusak I. Biochemical symptoms of catabolism // Scrip. med. - 1983. - V. 56, N3. - P.155-166.

27. Carter S.A. Effects of ambulation on foot oxygen tension in limbs with peripheral atherosclerosis // Clin.Physiol., 1996, V.16, No.3, p.199-208.

28. Cooper A.J.L. Biochemistry of sulfurcontaining amino acids // Ann. Rev. Biochem. - 1983. - V. 52. - P. 187-222.

29. Disodium-ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) has no effect on blood lipids in atherosclerotic patients. A randomized, placebo-controlled study / Guldager B., Faergeman O., Jorgensen S.J., et al. // Dan.Med.Bull.—1993.—V.40,No.5.—P. 625-627.

30. Hayes K., Sturman J.A. Taurine in metabolism // Ann. Rev. Nutr. - 1981. - V. 1. - P. 401-425.

31. Holden J.T. Amino Acid Pools. — Amsterdam: Elsevier, 1962. — 815 p.

32. Huxtable R., Pasantes-Morales H. Taurine in Nutrition and Neurology. - N.Y.: Plenum Press, 1978. - 551 p.

33. Lassila R. The thrombogenic and vasoactive effects of cigarette smoking with special reference to peripheral arterial disease: Acad. diss. / Wihuri research inst., first Dep. of intern. medicine a. fourth Dep. of surgery, Univ. of Helsinki, Finland. - Helsinki, 1989. - 90 p.

34. Lewis J.B. Amino acid analysis: buffers and artifacts // J. Chromatogr. - 1988. - V. 436, N1. - P. 80-85.

35. Martensson J., Larsson J., Schildt B. Metabolic effects of amino acid solutions on severely burned patients: with emphasis on sulfur amino acid metabolism and protein breakdown // J. Trauma. - 1985. - V. 25. - P. 427-432.

36. New techniques in amino acid, peptide and protein analysis / ed. by A. Niederwieser and G. Pataki - Ann Arbor Sci. Publ., Inc. - 1971, 462 p.

37. Rivera S., Azcon-Bieto Y., Lopes-Yoriano F.J. Amino acid metabolism in tumor-bearing mice // Biochem. J. - 1988. - V. 249. - P. 443-449.

38. Rivera S., Azcon-Bieto Y., Lopessoriano F. Blood amino acid compartmentalization and activities of the enzyme of amino acid metabolism in mice // Biochem. Soc. Trans. - 1986. - V. 14, N6. - P. 1052-1053.

39. The role of amino acids in the brain/ Quastel J.H., Marks V., Lajtha A., et al.. - London. - N.Y.: Raven Press, 1979. - 298 p.

40. Wurtman R., Heffi F., Melamed E. Precursor control of neurotransmitter synthesis. // Pharmacol.Rev. — 1980. — V.32. — No.4. — pp.315-335.

Поступила 26 августа 2001 года